项目简介

　　由真菌(林伯氏白色念球菌,Tritirachium album Limber)产生的蛋白酶K，是一种枯草蛋白酶类的高活性,切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。 将合成的蛋白酶K基因连接到黑曲霉表达载体上，将构建好的表达载体转入宿主黑曲霉中，使其表达蛋白酶K。挑选表达量最高的转化子通过酶学特性质研究，分析得到黑曲霉生产的蛋白酶K的最适温度和pH，最终选定海藻糖作为蛋白酶K的保护剂，有效地提高蛋白酶K在强碱条件下的酶活，蛋白酶K的酶活已达到>4000单位/毫升(福林法)，蛋白量接近1克/升(蛋白质电泳胶)，目前已经申请专利1项。用紫外诱变方法，经过两轮筛选得到了蛋白酶K表达量有明显提高的突变株，目前，突变株正在验证中，下一步准备纯化突变株发酵生产的蛋白酶K。

应用行业

　　生物、医药技术

专利情况

　　已有专利1个

产业化前景分析

　　初步估计蛋白酶K市场已超过百万美元。目前中国市场上大部分蛋白酶K都是来源于国外,最主要的是Merck，Roche，Fermentas和Amresco，其中Roche，Fermentas是用毕赤酵母表达的蛋白酶K(专利号: US 7,368,274)。国外价格在500元-600元左右/每100mg (5000元/克)。国内进口蛋白酶K每克售价在3000元到4000元。目前国内有一家公司（金普诺安蛋白质工程技术（北京）有限公司）针对蛋白酶K基因进行了突变并在毕赤酵母中成功表达。

应用范围

　　蛋白酶K切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。主要用于基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶，也可以用于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。

经济效益分析

　　目前，纯化后的蛋白酶K国外市场价格每100mg 在500元-600元 (5000元/克)，我们的摇瓶发酵成本低于20元/克，提纯成本预计为100元/克，总成本将低于300元/克。 目标客户为Merck，Roche，Fermentas，sigma和国内基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒等公司。

对投资者和投资环境的要求

希望能与了解蛋白酶应用市场情况，市场开拓和营销能力强，资金和技术实力较为雄厚，有一定技术基础的企业合作。