成果简介：

  本研究以市售纳豆为原料，分离出一株高产菌株，扩增 16SrDNA 序列并进行同源性比对与系统进化树分析，鉴定为枯草芽孢杆菌。利用改进纤维蛋白平板法测定纳豆激酶的活性，测定的所筛选菌株的初始酶活性为 467.18U/mL。优化该菌株的液体发酵条件，其培养温度 38℃，pH 值 7.0，发酵时间 26h，转速 180 r/min，种龄7h，接种量 2%，装液量 25 mL/250mL，发酵周期为 26h。液体发酵培养基的最佳碳源为淀粉，浓度为 2.0%；最佳氮源为酵母粉，浓度为 1.5%；通过优化培养基，产酶量可达到 1085U/mL；通过对纳豆枯草芽孢杆菌发酵，经发酵液的预处理，硫酸铵盐析，透析脱盐和 Sephadex G-75凝胶层析分离纯化，最终得到纯度比较高的纳豆激酶，最终比活达到了13849. 9 IU⋅ mg-1。最终的纯化倍数是21.4，酶活回收率是77.84%；大鼠体内溶栓检测表明，纳豆激酶处理组与单纯血栓组相比较，血栓湿质量与血栓干质量均明显降低（P<0.01），高剂量纳豆激酶组与低剂量纳豆激酶组血栓湿质量均轻于尿激酶组（P<0.01），表明纳豆激

酶可以显著抑制大鼠血栓的生成。本研究成果可为纳豆激酶作为新型溶栓药物的工业化生产和临床使用提供了科学依据和前期基础，有助于解决目前溶栓药物的副作用大、半衰期短和价格昂贵等多种问题。

经济效益分析：

  随着生活水平的提高，人类寿命逐渐延长，但血栓栓塞性疾病的发病率也有逐年上升的趋势。世界心脏学会联合公布最新统计资料显示，由心血管疾病引起的死亡已经跃居各类疾病之首。而目前临床上使用的治疗心脑血管栓塞的药品如链激酶，尿激酶，t-PA 等均在不同程度上存在一定的缺陷，或者毒性较强，副作用

大，易造成严重的出血反应，尤其是颅内出血的危险很大；或者体内半衰期短，难以发挥药效；或者来源紧张，价格昂贵。跟传统的溶栓剂相比较，纳豆激酶可以进行大规模液体发酵生产，成本低廉。相同活力单位的纳豆激酶其生产成本仅为蚓激酶的 1/4 左右，并且作为抗血栓药物和保健产品的前景十分广阔。

风险分析：

  纳豆激酶可以进行大规模液体发酵生产，发酵生产工艺条件已经确定，生产成本低廉。生产菌种活力较高，纯化工艺较为成熟，成果转化风险较低。